Plásmido CRISPR de Activación (h) SMU1: sc-404541-ACT

SMU1 (homólogo 1 del supresor de mec-8 y unc-52) codifica un factor conservado de empalme de pre-ARNm que se asocia con el espliceosoma y favorece la eliminación precisa de intrones y la correcta definición de exones. A través de sus interacciones con otros reguladores del empalme, SMU1 contribuye a la integridad del transcriptoma, a las decisiones de empalme alternativo y al control posterior de la progresión del ciclo celular y de los programas de expresión génica sensibles al estrés. La perturbación del empalme dependiente de SMU1 puede desplazar el equilibrio de isoformas y alterar la expresión de genes implicados en el mantenimiento del genoma y la proliferación. En consecuencia, la actividad espliceosomal desregulada que involucra a SMU1 es de interés en estudios de defectos en el procesamiento del ARN vinculados a firmas de empalme asociadas al cáncer y a otros trastornos impulsados por una maduración aberrante del ARNm.

SMU1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SMU1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SMU1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SMU1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SMU1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SMU1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SMU1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SMU1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SMU1 en células tumorales con expresión de SMU1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.