smoothelin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400923

Übersicht

SMTN kodiert Smoothelin, ein Zytoskelettprotein, das selektiv in vollständig differenzierten glatten Muskelzellen angereichert ist, wo es mit der Organisation von Aktinfilamenten und der Integrität des kontraktilen Apparats assoziiert ist. Smoothelin trägt zur Regulation der Kontraktilität glatter Muskulatur, der zellulären Architektur und der phänotypischen Stabilität während des Remodellings der vaskulären und viszeralen glatten Muskulatur bei. Veränderte SMTN-Expressionsmuster werden als Marker für den Differenzierungszustand glatter Muskelzellen genutzt und stehen mit Prozessen wie vaskulärem Remodeling, fibroseassoziierten Myofibroblasten-Übergängen und Veränderungen des Gefäßtonus in Zusammenhang. Als linienrestriktierte Zytoskelettkomponente ist SMTN relevant für die Untersuchung von Mechanismen, die die Reifung glatter Muskelzellen, die Mechanotransduktion und zytoskelettale Signalnetzwerke steuern.

Das smoothelin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SMTN-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SMTN-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SMTN nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die smoothelin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SMTN-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der smoothelin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SMTN-Exone abzielen, die für die smoothelin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SMTN-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom smoothelin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom smoothelin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SMTN-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das smoothelin HDR-Plasmid (h) und smoothelin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SMTN-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SMTN-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.