smoothelin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400923

概要

SMTN は、スムーステリン（smoothelin）をコードする遺伝子であり、完全に分化した平滑筋細胞に選択的に高発現する細胞骨格タンパク質です。スムーステリンはアクチンフィラメントの構築や収縮装置の完全性の維持に関与します。さらに、血管および内臓の平滑筋リモデリング過程において、平滑筋の収縮性、細胞構造、表現型の安定性の制御に寄与します。SMTN の発現パターンの変化は平滑筋の分化状態を示すマーカーとして用いられ、血管リモデリング、線維化に伴う筋線維芽細胞（myofibroblast）への移行、血管トーンの変化などのプロセスに関与すると考えられています。系譜（ライン）特異的な細胞骨格成分として、SMTN は平滑筋の成熟、メカノトランスダクション、ならびに細胞骨格シグナル伝達ネットワークを制御する機構の研究において重要です。

smoothelin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSMTN遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SMTN内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SMTNのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、smoothelinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、smoothelinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SMTN欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• smoothelinの機能に不可欠なSMTNエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SMTNゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• smoothelin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびsmoothelin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SMTN遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  smoothelin HDRプラスミド（h）および smoothelin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSMTNホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSMTN標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。