SmcX Double Nickase Plasmid (m): sc-423030-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SmcX Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SmcX Double-Nickase-Plasmid (m) und SmcX Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Kdm5c abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SmcX: sc-376255
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SmcX Double Nickase Plasmid (m) | sc-423030-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SmcX Double Nickase Plasmid (m2) | sc-423030-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Kdm5c (SmcX) kodiert eine X‑chromosomal lokalisierte Histon-Lysin-Demethylase, die H3K4me2/3-Markierungen entfernt und so Transkriptionsprogramme sowie die Chromatinzugänglichkeit in Mauszellen formt. SmcX ist an der epigenetischen Regulation der neuronalen Entwicklung, der synaptischen Funktion und von Zellschicksalsentscheidungen beteiligt, indem es die Aktivität von Promotoren und Enhancern in RNA‑Polymerase‑II‑abhängigen Genexpressionswegen moduliert. Eine Störung von Kdm5c verändert aktivitätsabhängige Transkription und steht mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung; dies bietet einen mechanistischen Ansatzpunkt, um chromatingesteuerte Regulation von Kognition und Verhalten zu untersuchen. Darüber hinaus unterstützt die Kdm5c‑abhängige Kontrolle von Differenzierung und zellzyklusassoziierter Transkription die Forschung zu kontextspezifischem epigenetischem Remodelling in verschiedenen Geweben.
SmcX Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Kdm5c-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Kdm5c abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Kdm5c-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Kdm5c-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.