SMCR7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406975

概要

MIEF2はミトコンドリア伸長因子2タンパク質（SMCR7/MiD51）をコードしており、これはミトコンドリア外膜に存在するアダプターとしてGTPアーゼであるDRP1をリクルートして配置することで、ミトコンドリア分裂を制御します。ミトコンドリアネットワークの構造を調節することにより、MIEF2は酸化的リン酸化の効率、活性酸素種（ROS）のバランス、ならびにマイトファジーなどのミトコンドリア品質管理経路に影響し、その結果として細胞代謝やストレス応答に関与します。MIEF2活性の変化は、神経変性、心代謝機能障害、がんに関連した代謝リプログラミングで見られるミトコンドリア動態の破綻と関連づけられています。オルガネラ形態とバイオエネルギーシグナル伝達を結び付ける結節点として、MIEF2はアポトーシス感受性、ミトコンドリア由来の自然免疫シグナル、低酸素や栄養ストレスへの適応に関する研究で頻繁に解析されています。

SMCR7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMIEF2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MIEF2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MIEF2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SMCR7タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SMCR7シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MIEF2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SMCR7の機能に不可欠なMIEF2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MIEF2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SMCR7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSMCR7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MIEF2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SMCR7 HDRプラスミド（h）および SMCR7 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMIEF2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMIEF2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。