Plásmido Doble Nickase (h) SLPI: sc-418559-NIC

El inhibidor secretorio de la peptidasa leucocitaria (SLPI) es un inhibidor pequeño y secretado de proteasas de serina que ayuda a mantener la homeostasis de la barrera epitelial y mucosa al limitar la actividad de la elastasa de neutrófilos, la catepsina G y otras proteasas relacionadas. Más allá de su función antiproteasa, SLPI puede modular la señalización inmunitaria innata y la expresión de genes inflamatorios, influyendo en procesos como la reparación de heridas, la defensa antimicrobiana y el reclutamiento de leucocitos. Se han descrito alteraciones en la expresión de SLPI en afecciones inflamatorias de las vías respiratorias y de la piel, en la inflamación mucosa crónica y en la remodelación tisular asociada a infecciones, lo que lo convierte en un nodo molecular útil para estudiar el equilibrio proteasa–antiproteasa. Por ello, SLPI es relevante para investigaciones sobre biología epitelial, regulación inmunitaria y factores del microambiente que moldean la inflamación asociada a enfermedades.

SLPI El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SLPI en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SLPI. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SLPI. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SLPI alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.