SIRP-α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401201

Übersicht

Das Signal-regulatorische Protein Alpha (SIRP-α), kodiert durch das menschliche Gen **SIRPA**, ist ein transmembraner Rezeptor der Immunglobulin-Superfamilie, der vor allem auf myeloiden Zellen stark exprimiert wird und dort die Aktivierung der angeborenen Immunantwort moduliert. Durch die Phosphorylierung zytoplasmatischer ITIM-Motive und die Rekrutierung der Phosphatasen SHP-1/SHP-2 vermittelt SIRP-α nach Bindung von CD47 inhibitorische Signale, die die Zytoskelettdynamik, Phagozytose, Zelladhäsion und Zytokinantworten regulieren. Diese CD47–SIRP-α-Achse prägt das Verhalten von Makrophagen und dendritischen Zellen in entzündlichen Mikroumgebungen und wurde mit Tumor-Immunevasion, chronischen Entzündungen und einer fehlregulierten myeloiden Funktion in Verbindung gebracht. SIRPA wird daher breit in Signalwegen untersucht, die die Immunhomöostase, die Funktion antigenpräsentierender Zellen und die Zell-Zell-Erkennung steuern.

Das SIRP-α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SIRPA-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SIRPA-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SIRPA nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SIRP-α-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SIRPA-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SIRP-α-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SIRPA-Exone abzielen, die für die SIRP-α-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SIRPA-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SIRP-α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SIRP-α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SIRPA-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SIRP-α HDR-Plasmid (h) und SIRP-α HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SIRPA-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SIRPA-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.