SIP1/ZEB2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400655-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SIP1/ZEB2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SIP1/ZEB2 Double-Nickase-Plasmid (h) und SIP1/ZEB2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ZEB2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SIP1/ZEB2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400655-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SIP1/ZEB2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400655-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ZEB2 (auch als SIP1 bekannt) kodiert einen Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der an E-Box-Sequenzen bindet und überwiegend als Transkriptionsrepressor wirkt. Er steuert die epithelial-mesenchymale Transition (EMT), die Festlegung von Zelllinien und Entscheidungen über das Zellschicksal. Durch Bindung an E-Box-Motive und die Rekrutierung von Corepressor-Komplexen, die mit CtBP bzw. SMAD assoziiert sind, verknüpft SIP1/ZEB2 die TGF-β-/BMP-Signalübertragung mit Programmen des Chromatin-Remodelings und moduliert so Gene der epithelialen Polarität, Zelladhäsion und migratorische Phänotypen. ZEB2-abhängige Transkriptionsnetzwerke tragen zur Entwicklung der Neuralleiste und zur Differenzierung von Immunzellen bei; eine Fehlregulation von ZEB2-Expression oder -Aktivität ist mit Entwicklungssyndromen sowie veränderten Differenzierungszuständen in krebsrelevanten Kontexten verbunden. Diese Eigenschaften machen ZEB2 zu einem häufig genutzten Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Transkriptionskontrolle, Plastizität und Kopplung von Signalwegen an Genexpression.
SIP1/ZEB2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ZEB2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ZEB2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ZEB2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ZEB2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.