Siglec-9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406675

Übersicht

SIGLEC9 kodiert Siglec-9, ein sialinsäurebindendes, immunglobulinähnliches Lektin, das überwiegend auf Neutrophilen, Monozyten und bestimmten Subpopulationen von NK-Zellen exprimiert wird und dort als inhibitorischer Rezeptor fungiert. Über eine vom immunorezeptor-tyrosinbasierten Inhibitionsmotiv (ITIM) abhängige Signalübertragung und die Rekrutierung von Phosphatasen wie SHP-1/2 dämpft Siglec-9 aktivierende Signale nachgeschaltet an Mustererkennungs- und Fc-Rezeptor-Signalwegen und beeinflusst so Zytokinfreisetzung, Degranulation und oxidativen Burst. Durch das Erkennen sialylierter Glykane auf Wirts- oder mikrobiellen Oberflächen trägt es zur Immunhomöostase sowie zur Modulation von Entzündungsreaktionen an mukosalen und vaskulären Grenzflächen bei. Eine fehlregulierte SIGLEC9-Signalgebung und veränderte Sialylierungslandschaften wurden u. a. im Kontext chronisch-entzündlicher Erkrankungen, der Infektionsbiologie und der tumorassoziierten Immunsuppression innerhalb des myeloischen Kompartiments untersucht.

Das Siglec-9 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SIGLEC9-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SIGLEC9-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SIGLEC9 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Siglec-9-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SIGLEC9-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Siglec-9-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SIGLEC9-Exone abzielen, die für die Siglec-9-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SIGLEC9-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Siglec-9 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Siglec-9 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SIGLEC9-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Siglec-9 HDR-Plasmid (h) und Siglec-9 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SIGLEC9-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SIGLEC9-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.