Siglec-12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-413805

Übersicht

SIGLEC12 kodiert Siglec-12, ein atypisches sialinsäurebindendes Lektin der Immunglobulin-Superfamilie, das in ausgewählten epithelialen und immunologischen Kontexten exprimiert wird und an der Zelloberfläche lokalisiert ist. Als Mitglied der Siglec-Familie ist Siglec-12 an glykanabhängigen Erkennungsereignissen beteiligt, die Zell-Zell-Interaktionen, Endozytose und die Modulation von Signalausgaben nachgeschaltet immunrezeptorassoziierter Signalwege beeinflussen können. Das menschliche Protein gilt aufgrund von Veränderungen in konservierten Motiven als funktionell von kanonischen inhibitorischen Siglecs abweichend und ist daher ein nützliches Modell zur Untersuchung divergierender Signalübertragung glyko-immunologischer Rezeptoren. Eine fehlregulierte Siglec-12-Expression wurde im Kontext der Tumorbiologie und entzündlicher Mikroumgebungen untersucht und unterstützt die Forschung zu glykosylierungsabhängigen Phänotypen sowie zum Immun–Epithel-Crosstalk.

Das Siglec-12 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SIGLEC12-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SIGLEC12-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SIGLEC12 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Siglec-12-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SIGLEC12-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Siglec-12-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SIGLEC12-Exone abzielen, die für die Siglec-12-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SIGLEC12-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Siglec-12 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Siglec-12 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SIGLEC12-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Siglec-12 HDR-Plasmid (h) und Siglec-12 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SIGLEC12-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SIGLEC12-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.