SHBG CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402099

Übersicht

Das Sexualhormon-bindende Globulin (SHBG) ist ein sezerniertes Plasmaglykoprotein, das Androgene und Östrogene bindet und transportiert und dadurch den freien Anteil zirkulierender Steroide reguliert sowie die Hormonverfügbarkeit für Zielgewebe moduliert. Indem SHBG die Steroidverteilung abpuffert und die Hormonzufuhr zu Zellen beeinflusst, trägt es zur endokrinen Homöostase und zu steroidresponsiven Transkriptionsprogrammen bei, die den Stoffwechsel und die Reproduktionsphysiologie prägen. Veränderungen in der SHBG-Expression oder -Funktion wurden mit einer veränderten Bioverfügbarkeit von Sexualsteroiden in Verbindung gebracht und werden häufig im Zusammenhang mit metabolischen Merkmalen und der Biologie hormonabhängiger Erkrankungen untersucht, einschließlich dysreguliertem Glukose- und Lipidstoffwechsel sowie reproduktionsendokrinen Phänotypen. In-vitro- und In-vivo-Modelle mit SHBG-Störungen werden eingesetzt, um Mechanismen zu entschlüsseln, die den Steroidtransport mit nachgeschalteten Signalnetzwerken und Veränderungen der Genexpression in der Leber und peripheren Geweben verknüpfen.

Das SHBG CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SHBG-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SHBG-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SHBG nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SHBG-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SHBG-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SHBG-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SHBG-Exone abzielen, die für die SHBG-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SHBG-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SHBG CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SHBG CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SHBG-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SHBG HDR-Plasmid (h) und SHBG HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SHBG-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SHBG-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.