Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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SH2-B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422909
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SH2-B Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico SH2-B, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SH2-B α/β/γ/δ Antibody (C-11): sc-514142
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SH2-B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-422909 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene murino Sh2b1 codifica la proteina adattatrice SH2-B, un’impalcatura di segnalazione citoplasmatica che collega le tirosin-chinasi recettoriali attivate e i recettori per le citochine a vie a valle quali JAK/STAT, PI3K–AKT e MAPK. Tramite il suo dominio SH2 e i motivi di interazione proteina–proteina, SH2-B modula l’ampiezza e la durata del segnale, influenzando proliferazione cellulare, differenziamento e regolazione metabolica. La segnalazione dipendente da Sh2b1 è ampiamente studiata nel contesto dell’omeostasi energetica e delle reti responsivi a insulina/leptina, e un’alterata funzione di SH2B1 è stata associata a fenotipi che coinvolgono disregolazione metabolica e controllo neuroendocrino. Nei sistemi immunitario e neuronale, SH2-B contribuisce inoltre a eventi di segnalazione mediati da recettori che modellano le risposte infiammatorie e i processi sinaptici/associati a sinapsi e neuriti.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SH2-B (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sh2b1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sh2b1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sh2b1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SH2-B.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sh2b1 per lo studio della segnalazione di SH2-B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Sh2b1 critici per la funzione di SH2-B
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sh2b1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal SH2-B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SH2-B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sh2b1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal SH2-B Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SH2-B (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sh2b1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sh2b1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.