Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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SH2-B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422909
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- SH2-B Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im SH2-B-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SH2-B α/β/γ/δ: sc-514142
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SH2-B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-422909 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Das murine Gen **Sh2b1** kodiert das Adapterprotein **SH2-B**, ein zytoplasmatisches Signalgerüst, das aktivierte Rezeptor-Tyrosinkinasen und Zytokinrezeptoren mit nachgeschalteten Signalwegen wie **JAK/STAT**, **PI3K–AKT** und **MAPK** koppelt. Über seine **SH2-Domäne** und Motive für Protein-Protein-Interaktionen moduliert SH2-B Stärke und Dauer von Signalen und beeinflusst so zelluläre Proliferation, Differenzierung und die metabolische Regulation. Die Sh2b1-abhängige Signalübertragung wird intensiv im Kontext der Energiehomöostase sowie insulin- und leptinresponsiver Netzwerke untersucht; eine veränderte SH2B1-Funktion wurde mit Phänotypen in Verbindung gebracht, die metabolische Dysregulation und neuroendokrine Kontrolle betreffen. In Immun- und Nervensystemen trägt SH2-B zudem zu rezeptorvermittelten Signalereignissen bei, die Entzündungsreaktionen und synaptische bzw. neuritenassoziierte Prozesse prägen.
Das SH2-B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sh2b1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sh2b1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sh2b1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SH2-B-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sh2b1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SH2-B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Sh2b1-Exone abzielen, die für die SH2-B-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sh2b1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom SH2-B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SH2-B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sh2b1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SH2-B HDR-Plasmid (m) und SH2-B HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sh2b1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sh2b1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.