SerpinB1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402083-ACT

SERPINB1 codifica l’inibitore intracellulare delle proteasi seriniche SerpinB1, una serpin del clade B che limita l’azione delle proteasi derivate dai neutrofili, come elastasi, catepsina G e proteinasi 3, per ridurre il danno proteolitico durante l’infiammazione. Modulando l’attività proteasica, SerpinB1 influenza la sopravvivenza dei leucociti, le risposte antimicrobiche e i programmi di rimodellamento tissutale che si intersecano con la segnalazione dell’immunità innata e con le vie di risposta allo stress infiammatorio. Un’espressione o un’attività di SERPINB1 deregolate sono state associate ad alterazioni dell’omeostasi infiammatoria e a danni mediati da proteasi in condizioni che interessano i tessuti mucosali e polmonari, oltre che in contesti più ampi di patologie immunomediate. Queste caratteristiche rendono SERPINB1 un nodo utile per studiare l’equilibrio proteasi–antiproteasi, la biologia dei neutrofili e il rimodellamento associato all’infiammazione.

SerpinB1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SERPINB1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SerpinB1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SERPINB1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SERPINB1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SerpinB1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SERPINB1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SerpinB1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SerpinB1 nelle cellule tumorali con espressione di SERPINB1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.