Plasmide CRISPR/Cas9 KO SERF1 (m): sc-422894

Présentation

Serf1 code le small EDRK-rich factor 1 (SERF1), une protéine hautement conservée et intrinsèquement désordonnée, impliquée dans la protéostasie et des processus associés à l’ARN. SERF1 a été associée à la modulation de la dynamique d’agrégation des protéines et aux réponses au stress cellulaire, avec des interactions rapportées qui influencent la fonction nucléolaire et le métabolisme de l’ARN. Dans les systèmes murins, Serf1 est étudié pour sa contribution à l’homéostasie neuronale et au développement, où des réseaux de protéostasie altérés sont pertinents pour la neurodégénérescence et d’autres phénotypes liés au mauvais repliement des protéines. Des perturbations de Serf1 par perte ou gain de fonction permettent des études mécanistiques reliant les voies de chaperons, l’organisation des ribonucléoprotéines et des protéines sujettes à l’agrégation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SERF1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Serf1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Serf1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Serf1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SERF1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Serf1 pour l'étude de la signalisation de SERF1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Serf1 essentiels à la fonction de SERF1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Serf1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SERF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SERF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Serf1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SERF1 plasmide HDR (m) et le SERF1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Serf1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Serf1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.