Plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA6C (m): sc-422889

Présentation

Sema6c code la sémaphorine de classe 6 SEMA6C, un signal de guidage transmembranaire qui régule la signalisation dépendante du contact lors de la mise en place des tissus. Par ses interactions avec les récepteurs plexines et la signalisation associée des GTPases de la famille Rho, SEMA6C influence le remodelage du cytosquelette, la polarité cellulaire, la migration et la croissance des neurites. Les voies sémaphorine–plexine sont également impliquées dans la formation des faisceaux axonaux et la connectivité synaptique, et une altération de la signalisation des sémaphorines a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs dans des systèmes modèles. En outre, des membres de la famille SEMA6 peuvent moduler le comportement des cellules vasculaires et immunitaires, ce qui étaye l’étude de la communication intercellulaire dans des contextes de développement et liés à l’inflammation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA6C (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sema6c dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sema6c, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sema6c à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SEMA6C.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sema6c pour l'étude de la signalisation de SEMA6C, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sema6c essentiels à la fonction de SEMA6C
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sema6c pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SEMA6C plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SEMA6C plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sema6c. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SEMA6C plasmide HDR (m) et le SEMA6C (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sema6c pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sema6c définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.