SEMA3G CRISPR Activation Plasmid (m): sc-432329-ACT

Sema3g kodiert Semaphorin 3G (SEMA3G), ein sezerniertes Semaphorin der Klasse 3, das zur Koordination interzellulärer Leitsignale beiträgt, welche Zellmigration, Adhäsion und Gewebemusterbildung beeinflussen. SEMA3G signalisiert vorwiegend über Neuropilin- und Plexin-Rezeptorkomplexe, um die Zytoskelettdynamik und nachgeschaltete Signalwege wie die Rho-Familie der GTPasen zu modulieren, und beeinflusst dadurch gerichtete Motilität und Morphogenese. In Mausmodellen wurde veränderte Semaphorin-Signalgebung mit fehlregulierter neurovaskulärer Musterbildung, angiogenem Remodeling und dem Trafficking entzündlicher Zellen in Verbindung gebracht, was Sema3g für Studien zur Entwicklung sowie zu krankheitsassoziierten Veränderungen des Mikromilieus relevant macht. Der Signalweg-Kontext unterstützt die Untersuchung, wie extrazelluläre Guidance-Liganden das Verhalten von Endothelzellen, neuronale Konnektivität und die Organisation des Stromas umgestalten.

SEMA3G Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Sema3g-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SEMA3G Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Sema3g-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Sema3g-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SEMA3G-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Sema3g-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SEMA3G-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SEMA3G-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Sema3g-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.