SEMA3E CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404797-ACT

SEMA3Eは、分泌性のガイダンス因子であるセマフォリン3Eをコードしており、主にプレキシン受容体を介してシグナルを伝達し、細胞骨格リモデリング、細胞移動、ならびに方向性のあるナビゲーションを制御します。軸索ガイダンスにおける役割に加えて、SEMA3Eは血管パターニングや内皮細胞の挙動にも影響し、接着ダイナミクスやRhoファミリーGTPアーゼ活性を制御する経路と統合的に関与します。SEMA3Eシグナルの異常は、複数の疾患コンテキストにおいて、浸潤能の変化、血管新生応答、組織微小環境のリモデリングと関連づけられており、運動性や発生シグナル伝達を研究する上で重要なノードとなります。これらの機能により、SEMA3Eは、細胞外ガイダンス因子が細胞状態の遷移や組織構築をどのように形作るかを探るための有用な分子学的手がかりとなります。

SEMA3E CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SEMA3Eの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SEMA3E CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SEMA3E 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSEMA3E転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SEMA3Eの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSEMA3E遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSEMA3E依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSEMA3E発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSEMA3E経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。