SDHD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2): sc-403276-KO-2

Übersicht

Succinat-Dehydrogenase-Komplex, Untereinheit D (SDHD), ist eine wesentliche, membranverankernde Komponente des mitochondrialen Komplexes II und koppelt die Succinatoxidation im Tricarbonsäurezyklus (TCA-Zyklus) an den Elektronentransfer in den Ubichinon-Pool des oxidativen Phosphorylierungswegs (OXPHOS). Durch die Unterstützung der Umwandlung von Succinat zu Fumarat und des Flusses durch die Atmungskette trägt SDHD zur Aufrechterhaltung des mitochondrialen Redoxgleichgewichts, der ATP-Produktion und der Homöostase reaktiver Sauerstoffspezies bei. Eine Störung der SDHD-Funktion verändert die metabolische Signalgebung, einschließlich der succinatabhängigen Regulation hypoxie-reaktiver Signalwege sowie umfassenderer mitochondrialer Stressantworten. Eine Fehlregulation von SDHD ist an erblichen und sporadischen Tumorprädispositionssyndromen beteiligt, die neuroendokrine und paraganglionäre Zelllinien betreffen, und macht SDHD zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zum mitochondrialen Stoffwechsel und krankheitsrelevanter Signalübertragung.

Das SDHD CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SDHD-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SDHD-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SDHD nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SDHD-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SDHD-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SDHD-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SDHD-Exone abzielen, die für die SDHD-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SDHD-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SDHD CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SDHD CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SDHD-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SDHD HDR-Plasmid (h) und SDHD HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SDHD-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SDHD-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.