Sclerostin Double Nickase Plasmid (h): sc-401527-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Sclerostin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Sclerostin Double-Nickase-Plasmid (h) und Sclerostin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SOST abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Sclerostin: sc-518161
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Sclerostin Double Nickase Plasmid (h) | sc-401527-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Sclerostin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401527-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SOST kodiert Sclerostin, ein sezerniertes Glykoprotein, das überwiegend von Osteozyten produziert wird und als zentraler extrazellulärer Inhibitor des kanonischen Wnt/β‑Catenin-Signalwegs wirkt, indem es an die Korezeptoren LRP5/6 bindet und dadurch die Differenzierung und Aktivität von Osteoblasten begrenzt. Durch die Modulation der Wnt-Signalgebung und die Wechselwirkung mit BMP-Signalwegen trägt Sclerostin zur Regulation von Knochenbildung, Knochenumbau und mechanotransduktionsabhängigen Antworten im Skelettgewebe bei. Eine veränderte Expression oder Funktion von SOST ist mit abnormen Phänotypen der Knochenmasse verknüpft und wird häufig im Kontext osteoporosisrelevanter Signalwege, der Regulation der Knochendichte und der Skelettentwicklung untersucht. Über die Skelettbiologie hinaus ist die von Sclerostin vermittelte Wnt-Regulation auch für allgemeinere Studien zu Zellschicksal und extrazellulärer Signalgebung relevant, bei denen die Stärke („Tone“) des Wnt-Signalwegs Proliferations- und Differenzierungsprogramme beeinflusst.
Sclerostin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SOST-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SOST abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SOST-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SOST-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.