SCAMP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403757-ACT

SCAMP1 (proteína de membrana carreadora secretória 1) é uma proteína de membrana tetraspânica enriquecida em endossomos de reciclagem e vesículas de transporte, onde sustenta o tráfego de membranas regulado, o brotamento de vesículas e a reciclagem de cargas para a membrana plasmática. Atua em vias endocíticas e exocíticas que coordenam a renovação de receptores, a dinâmica de vesículas sinápticas e a liberação de grânulos secretórios, ligando a atividade de SCAMP1 à homeostase celular e à responsividade de sinalização. Ao influenciar o transporte mediado por vesículas e a remodelação de membranas, SCAMP1 pode modular a disponibilidade, na superfície celular, de receptores e transportadores de sinalização — processos frequentemente perturbados em distúrbios proliferativos e neurobiológicos. Redes de tráfego desreguladas envolvendo proteínas da família SCAMP têm sido investigadas em contextos que incluem secreção alterada, reciclagem aberrante de receptores e mudanças em fenótipos relacionados à migração e à invasão celular.

SCAMP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SCAMP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SCAMP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SCAMP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SCAMP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SCAMP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SCAMP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SCAMP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SCAMP1 em células tumorais com expressão de SCAMP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.