SASH1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403567-ACT

SASH1 (SAM- und SH3-Domäne enthaltend 1) kodiert ein zytoplasmatisches Scaffold-/Adaptorprotein, das an der Organisation von Signaltransduktionskomplexen nachgeschaltet an Rezeptoren und Stresssignalen beteiligt ist. In menschlichen Zellen wurde SASH1 mit der Regulation der Zytoskelettdynamik, der Zelladhäsion, der Migration sowie endothelialen Barriereprozessen in Verbindung gebracht, was mit Rollen bei der Kontrolle von Proliferation und Gewebearchitektur übereinstimmt. Veränderte SASH1-Expression und genetische Varianten wurden in mehreren Krankheitskontexten beschrieben, darunter Tumorbiologie sowie vaskuläre oder pigmentäre Phänotypen, was SASH1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung kontextabhängiger Signalausgänge macht. Diese Funktionen machen SASH1 zu einem Forschungsziel, um Signalwege zu analysieren, die extrazelluläre Signale mit Transkriptionsprogrammen und Zellmotilität koppeln.

SASH1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SASH1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SASH1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SASH1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SASH1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SASH1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SASH1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SASH1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SASH1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SASH1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.