SAS-6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401644-ACT

ヒトのSASS6は、中心小体の新生において九回対称性を成立させるために必須の、中心小体カートホイールの中核構成要素であるSAS-6をコードしている。SAS-6はプロ中心小体の形成と中心小体の複製を協調的に制御し、細胞周期を通じて中心体の完全性、微小管の編成、そして正確な有糸分裂紡錘体の形成を支える。SAS-6の制御破綻は、中心体増幅、染色体不安定性、ならびに増殖プログラムの変調と関連し、がんやその他の細胞周期関連病態の研究でしばしば取り上げられている。中心体／中心小体因子としてのSAS-6は、基底小体機能の障害に起因する線毛形成異常や、それに伴う発生表現型のモデルにも関与する。

SAS-6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SASS6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SAS-6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SASS6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSASS6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SAS-6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSASS6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSAS-6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSASS6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSAS-6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。