Plasmide CRISPR d'Activation (h) SARM: sc-403427-ACT

Le gène humain **SARM1** code la protéine 1 contenant des motifs **alpha stérile** et **TIR** (SARM), un régulateur central de la dégénérescence axonale programmée grâce à son activité **NADase** intrinsèque, qui entraîne une déplétion rapide en **NAD⁺** après une lésion neuronale. SARM intègre des signaux de stress en amont issus des voies d’entretien des axones, notamment l’homéostasie du **NAD⁺** dépendante de **NMNAT2**, et favorise un effondrement métabolique avec des effets en aval sur la fonction mitochondriale et l’intégrité du cytosquelette. Une signalisation SARM1 dérégulée est associée à des processus pertinents pour la neurodégénérescence, tels que la dégénérescence wallérienne, la neuropathie induite par la chimiothérapie et les lésions axonales traumatiques, ce qui en fait un nœud utile pour étudier des phénotypes neuronaux à l’interface de la neuroinflammation et dépendants du métabolisme énergétique. La modulation de l’expression de SARM1 permet d’interroger les mécanismes des programmes de survie axonale, les réponses neuronales au stress et la signalisation dépendante du **NAD⁺** dans divers modèles cellulaires.

SARM Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SARM1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SARM Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SARM1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SARM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SARM. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SARM1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SARM au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SARM dans les cellules tumorales présentant une expression de SARM1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.