SARM CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403427-ACT

Human SARM1 kodiert das sterile Alpha- und TIR-Motiv enthaltende Protein 1 (SARM), einen zentralen Regulator der programmierten Axondegeneration über seine intrinsische NADase-Aktivität, die nach neuronaler Schädigung eine rasche Depletion von NAD⁺ auslöst. SARM integriert vorgeschaltete Stresssignale aus axonalen Erhaltungswegen, einschließlich der NMNAT2-abhängigen NAD⁺-Homöostase, und fördert einen metabolischen Kollaps mit nachgeschalteten Auswirkungen auf die Mitochondrienfunktion und die Integrität des Zytoskeletts. Eine fehlregulierte SARM1-Signalgebung ist mit für Neurodegeneration relevanten Prozessen wie der Waller-Degeneration, chemotherapieinduzierter Neuropathie und traumatischer Axonverletzung verknüpft, was SARM1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung neuroinflammationsnaher und energie­stoffwechselabhängiger neuronaler Phänotypen macht. Die Modulation der SARM1-Expression unterstützt die mechanistische Analyse von Axon-Überlebensprogrammen, neuronalen Stressantworten und NAD⁺-abhängiger Signalgebung in unterschiedlichen Zellmodellen.

SARM Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SARM1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SARM Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SARM1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SARM1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SARM-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SARM1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SARM-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SARM-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SARM1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.