SAP-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403868-ACT

ELK4 kodiert den menschlichen ETS-Domänen-Transkriptionsfaktor SAP-1, einen nukleären Effektor der mitogenaktivierten Signalübertragung, der mit dem Serum Response Factor an Serum-Response-Elementen kooperiert, um Programme der unmittelbaren Frühgenexpression zu regulieren. SAP-1 wird nachgeschaltet von ERK/MAPK-Kaskaden aktiviert und hilft, extrazelluläre Wachstumsfaktor-Signale mit transkriptionellen Outputs zu koppeln, die Proliferation, Differenzierung und stressinduzierte Genexpression steuern. Als Mitglied der Ternary-Complex-Factor-Familie beeinflusst SAP-1 chromatinassoziierte transkriptionelle Dynamiken und trägt zu einer kontextabhängigen Regulation von Zellzyklus- und Überlebenssignalwegen bei. Eine fehlregulierte ELK4/SAP-1-Aktivität wurde mit onkogenen Signalnetzwerken und aberranten Transkriptionszuständen in Verbindung gebracht, die für die Tumorbiologie und andere proliferative Erkrankungen relevant sind.

SAP-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ELK4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SAP-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ELK4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ELK4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SAP-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ELK4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SAP-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SAP-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ELK4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.