SAMD9 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-418037-ACT

SAMD9 (sterile alpha motif domain containing 9) codifica una proteina citoplasmatica implicata nella regolazione dell’immunità innata e nel controllo della proliferazione cellulare, con ruoli descritti nella restrizione della replicazione virale e nella modulazione delle risposte stimolate dagli interferoni. La funzione di SAMD9 interseca programmi di risposta allo stress e vie omeostatiche che influenzano crescita e sopravvivenza cellulare, in linea con la sua attività proposta come regolatore negativo della proliferazione. Alterazioni genetiche di SAMD9 sono associate a fenotipi ereditari di insufficienza midollare e immunodeficienza, e sono implicate ricorrentemente nella sindrome mielodisplastica pediatrica tramite varianti germinali o acquisite. Questi collegamenti rendono SAMD9 un locus utile per studiare il controllo della crescita accoppiato all’infiammazione e i meccanismi di adattamento somatico nelle cellule ematopoietiche.

SAMD9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SAMD9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SAMD9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SAMD9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SAMD9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SAMD9. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SAMD9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SAMD9 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SAMD9 nelle cellule tumorali con espressione di SAMD9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.