SAMD9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418037-ACT

SAMD9 (domínio de motivo alfa estéril contendo 9) codifica uma proteína citoplasmática implicada na regulação da imunidade inata e no controlo da proliferação celular, com papéis descritos na restrição da replicação viral e na modulação de respostas estimuladas por interferão. A função de SAMD9 cruza-se com programas de resposta ao stress e vias homeostáticas que influenciam o crescimento e a sobrevivência celulares, em consonância com a sua atividade proposta como regulador negativo da proliferação. Alterações genéticas em SAMD9 estão associadas a fenótipos hereditários de falência medular e imunodeficiência, e são recorrentemente implicadas na síndrome mielodisplásica pediátrica por meio de variantes germinativas ou adquiridas. Estas ligações tornam o SAMD9 um locus útil para estudar o controlo do crescimento acoplado à inflamação e os mecanismos de adaptação somática em células hematopoiéticas.

SAMD9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SAMD9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SAMD9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SAMD9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SAMD9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SAMD9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SAMD9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SAMD9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SAMD9 em células tumorais com expressão de SAMD9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.