Plasmide CRISPR/Cas9 KO S-100 β chain (m): sc-422787

Présentation

S100b code la chaîne β de S-100, une protéine à motif EF-hand liant le Ca2+, enrichie dans les astrocytes et d’autres populations gliales, qui agit comme modulateur de signalisation intracellulaire et comme facteur paracrine extracellulaire. Par des interactions dépendantes du calcium avec des cibles cytosquelettiques et enzymatiques, S-100 β influence l’extension des neurites, la progression du cycle cellulaire et les réponses au stress, et peut activer des voies de signalisation médiées par des récepteurs, telles que les voies associées à RAGE, qui convergent vers les programmes MAPK et NF-κB. Dans le système nerveux central, S100b est largement utilisé comme marqueur glial et est associé à la neuroinflammation, à la régulation de la barrière hémato-encéphalique et aux réponses au stress oxydatif ou métabolique. Des altérations de l’expression de S100b ont été rapportées dans divers modèles de maladies neurologiques et neurodégénératives ainsi que dans des paradigmes de lésion, ce qui soutient son utilité pour analyser la communication glie–neurone et les réseaux de signalisation inflammatoire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO S-100 β chain (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène S100b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du S100b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert S100b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine S-100 β chain.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en S100b pour l'étude de la signalisation de S-100 β chain, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de S100b essentiels à la fonction de S-100 β chain
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de S100b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le S-100 β chain plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le S-100 β chain plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus S100b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le S-100 β chain plasmide HDR (m) et le S-100 β chain (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie S100b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles S100b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.