S-100 β chain CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400707

Übersicht

S100B kodiert die S-100-Beta-Kette, ein calciumbindendes Protein der S100-Familie, das die intrazelluläre Ca2+-Signalübertragung sowie extrazelluläre, rezeptorvermittelte Antworten in einer zellkontextabhängigen Weise moduliert. Es ist an der Regulation der Zytoskelettdynamik, des Zellzyklusfortschritts, von Reaktionen auf oxidativen Stress und der Entzündungssignalgebung beteiligt, einschließlich Interaktionen, die MAPK/ERK- und NF-κB-gekoppelte Prozesse beeinflussen. S-100β ist in der Astrozytenbiologie und Neuroinflammation intensiv untersucht, und eine veränderte Expression wurde mit neurologischen Verletzungen und neurodegenerativen Erkrankungen sowie mit Signalen im Tumormikromilieu bei bestimmten Krebsarten in Verbindung gebracht. Diese Funktionen machen S100B zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Analyse glialer Aktivierungszustände, von Stresssignalwegen und von Zell-Zell-Kommunikationspfaden.

Das S-100 β chain CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des S100B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des S100B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von S100B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die S-100 β chain-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von S100B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der S-100 β chain-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf S100B-Exone abzielen, die für die S-100 β chain-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere S100B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom S-100 β chain CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom S-100 β chain CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des S100B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das S-100 β chain HDR-Plasmid (h) und S-100 β chain HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von S100B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten S100B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.