S-100 β chain Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400707

Visão geral

S100B codifica a cadeia beta S-100, uma proteína ligante de cálcio da família S100 que modula a sinalização intracelular de Ca2+ e respostas extracelulares mediadas por receptores de maneira dependente do contexto celular. Participa da regulação da dinâmica do citoesqueleto, da progressão do ciclo celular, das respostas ao estresse oxidativo e da sinalização inflamatória, incluindo interações que influenciam processos ligados a MAPK/ERK e NF-κB. A S-100β é amplamente estudada na biologia de astrócitos e na neuroinflamação, e a expressão alterada tem sido associada a lesão neurológica e condições neurodegenerativas, bem como à sinalização do microambiente tumoral em certos cânceres. Essas funções tornam o S100B um nó útil para dissecar estados de ativação glial, sinalização de estresse e vias de comunicação célula–célula.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO S-100 β chain (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene S100B em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do S100B, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do S100B na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína S-100 β chain.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de S100B para a investigação da sinalização de S-100 β chain, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) S100B críticos para a função S-100 β chain
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos S100B para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo S-100 β chain Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo S-100 β chain Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus S100B. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo S-100 β chain Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR S-100 β chain (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia S100B para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo S100B definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.