RTEL1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403196-ACT

RTEL1 codifica a helicase 1 reguladora do alongamento dos telômeros, uma helicase de DNA essencial para manter a integridade dos telômeros e a estabilidade global do genoma. A RTEL1 promove a replicação fiel do DNA ao desmontar estruturas secundárias aberrantes, como T-loops e G-quadruplexos, favorecendo a progressão da forquilha de replicação e limitando a recombinação homóloga inapropriada. Por meio de suas funções na manutenção dos telômeros, na sinalização da resposta a danos no DNA e na supressão da instabilidade genômica, a RTEL1 influencia a senescência celular e a estabilidade cromossômica. A desregulação da função de RTEL1 tem sido associada a distúrbios da biologia dos telômeros e a maior suscetibilidade a fenótipos ligados à instabilidade genômica, relevantes para a biologia do câncer e para a pesquisa de doenças degenerativas.

RTEL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RTEL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RTEL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RTEL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RTEL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RTEL1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RTEL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RTEL1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RTEL1 em células tumorais com expressão de RTEL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.