Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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RPA40 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404594
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- RPA40 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico RPA40, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: RPA40 Anticuerpo (H-6): sc-374443
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
RPA40 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-404594 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
POLR1C codifica RPA40, una subunidad compartida de la ARN polimerasa I y la ARN polimerasa III que favorece el ensamblaje y la estabilidad de estos complejos de transcripción. A través de sus funciones en la síntesis de rRNA por la Pol I y en la transcripción de tRNAs y otros ARN pequeños no codificantes por la Pol III, RPA40 contribuye a la biogénesis ribosomal, la proteostasis y el control del crecimiento celular. La alteración del rendimiento transcripcional vinculado a POLR1C puede modificar la función nucleolar y las respuestas celulares al estrés, conectando este factor con vías que influyen en la proliferación y la diferenciación. Se han asociado variantes en POLR1C con trastornos hereditarios que afectan la mielina y el desarrollo craneofacial, lo que subraya la importancia de la integridad de la Pol I/III en la biología humana.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO RPA40 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen POLR1C en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del POLR1C junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de POLR1C tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RPA40.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en POLR1C para la investigación de la señalización de RPA40, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de POLR1C críticos para la función de RPA40
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de POLR1C para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido RPA40 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido RPA40 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus POLR1C. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RPA40 (h) y el plásmido HDR RPA40 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología POLR1C para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana POLR1C definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.