Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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RPA40 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404594
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RPA40 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico RPA40, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RPA40 Antibody (H-6): sc-374443
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RPA40 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-404594 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
POLR1C codifica RPA40, una subunità condivisa delle RNA polimerasi I e III che ne supporta l’assemblaggio e la stabilità di questi complessi trascrizionali. Grazie al suo ruolo nella sintesi dell’rRNA da parte della Pol I e nella trascrizione di tRNA e di altri piccoli RNA non codificanti da parte della Pol III, RPA40 contribuisce alla biogenesi dei ribosomi, alla proteostasi e al controllo della crescita cellulare. L’alterazione dell’output trascrizionale legato a POLR1C può modificare la funzione del nucleolo e le risposte cellulari allo stress, collegando questo fattore a vie che influenzano proliferazione e differenziamento. Varianti in POLR1C sono state associate a malattie ereditarie che colpiscono la mielina e lo sviluppo craniofacciale, sottolineando l’importanza dell’integrità delle Pol I/III nella biologia umana.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RPA40 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene POLR1C in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del POLR1C insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto POLR1C a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RPA40.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di POLR1C per lo studio della segnalazione di RPA40, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni POLR1C critici per la funzione di RPA40
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di POLR1C per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal RPA40 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RPA40 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus POLR1C. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal RPA40 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RPA40 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia POLR1C per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio POLR1C definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.