Plasmide CRISPR/Cas9 KO RPA135 (h): sc-402818

Présentation

POLR1B code pour RPA135, la deuxième plus grande sous-unité catalytique de l’ARN polymérase I, qui assure la synthèse du pré-ARNr 47S dans le nucléole. RPA135 est au cœur de la biogenèse des ribosomes et couple la signalisation des facteurs de croissance et l’état nutritionnel à la transcription de l’ADNr, ce qui l’associe à l’organisation nucléolaire, à la progression du cycle cellulaire et à la protéostasie. Une perturbation de la transcription par Pol I active des voies de stress nucléolaire qui convergent vers des points de contrôle dépendants de p53 et peuvent remodeler les programmes globaux de traduction. Une production d’ARNr dérégulée et une biogenèse ribosomique altérée sont des caractéristiques récurrentes des états prolifératifs et d’adaptation au stress, faisant de POLR1B un nœud pertinent pour étudier le contrôle transcriptionnel de l’ADNr et la fonction du nucléole.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RPA135 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène POLR1B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du POLR1B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert POLR1B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RPA135.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en POLR1B pour l'étude de la signalisation de RPA135, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de POLR1B essentiels à la fonction de RPA135
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de POLR1B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RPA135 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RPA135 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus POLR1B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RPA135 plasmide HDR (h) et le RPA135 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie POLR1B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles POLR1B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.