robo2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-435289

Panoramica

ROBO2 (recettore di guida Roundabout 2) codifica un recettore transmembrana nell’asse di segnalazione SLIT/ROBO, che regola la guida assonale, la migrazione neuronale e la morfogenesi tissutale attraverso il rimodellamento del citoscheletro e il movimento cellulare direzionale. Nel topo, la funzione di robo2 è collegata allo sviluppo del sistema nervoso e di molteplici strutture epiteliali, con effetti a valle su vie che controllano la polarità cellulare, l’adesione e segnali di guida repulsivi. Un’alterata attività di ROBO2 è stata associata ad anomalie congenite dello sviluppo e a fenotipi di migrazione cellulare disregolata, rendendolo rilevante per studi meccanicistici del neurosviluppo e dell’organogenesi. La sua segnalazione interagisce con processi dipendenti dalle GTPasi della famiglia Rho, che modellano la dinamica del cono di crescita e il posizionamento cellulare coordinato.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO robo2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Robo2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Robo2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Robo2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina robo2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Robo2 per lo studio della segnalazione di robo2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Robo2 critici per la funzione di robo2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Robo2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal robo2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal robo2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Robo2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal robo2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR robo2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Robo2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Robo2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.