Ribosomal Protein S19 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402405-ACT

RPS19 kodiert für das ribosomale Protein S19, einen essenziellen Bestandteil der kleinen 40S-Untereinheit des Ribosoms, der die Ribosomenbiogenese und eine präzise Initiation der Translation unterstützt. Über seine strukturelle Rolle im Ribosom hinaus trägt RPS19 zur nukleolären Reifung der Prä‑rRNA bei und ist in zelluläre Proteostase- und Stressantwortprogramme eingebunden, die die Proteinsynthese mit der Wachstumskontrolle koppeln. Eine Beeinträchtigung der RPS19-Funktion stört die erythroide Differenzierung und ist stark mit der Diamond–Blackfan-Anämie sowie mit ribosomopathieassoziierter, p53-abhängiger Stresssignalgebung verknüpft. Als zentrales Housekeeping-Gen wird die RPS19-Expression außerdem genutzt, um in humanen Zellmodellen die Translationskapazität, die Nukleolusfunktion und die Anpassung an metabolischen oder genotoxischen Stress zu untersuchen.

Ribosomal Protein S19 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen RPS19-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Ribosomal Protein S19 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des RPS19-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der RPS19-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Ribosomal Protein S19-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native RPS19-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Ribosomal Protein S19-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Ribosomal Protein S19-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem RPS19-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.