Ribosomal Protein LP0 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419183

Übersicht

Rplp0 kodiert das ribosomale Protein LP0 (P0), eine Kernkomponente der großen 60S-Ribosomenuntereinheit, die zusammen mit den P1/P2-Proteinen den ribosomalen Stiel bildet und während der Elongation die Rekrutierung von Translationsfaktoren sowie die Aktivierung von GTPasen unterstützt. Als konserviertes Housekeeping-Ribosomenprotein ist LP0 essenziell für die Ribosomenbiogenese, die globale Proteinsynthese sowie zelluläre Wachstums- und Stressanpassungsprogramme, die mit der Nukleolusfunktion verknüpft sind. Störungen ribosomaler Proteine können die translationale Kontrolle und die Proteostase beeinträchtigen und so zu ribosomopathieähnlichen Phänotypen sowie zu veränderter Proliferation, Apoptose und Differenzierung in krankheitsrelevanten Kontexten beitragen. In Maus-Systemen wird Rplp0 zudem häufig als Referenzgen verwendet, sodass eine gezielte Disruption aufschlussreich für die Bewertung von Normalisierungsstrategien und translationsabhängigen Phänotypen ist.

Das Ribosomal Protein LP0 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Rplp0-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Rplp0-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Rplp0 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Ribosomal Protein LP0-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Rplp0-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Ribosomal Protein LP0-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Rplp0-Exone abzielen, die für die Ribosomal Protein LP0-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Rplp0-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Ribosomal Protein LP0 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Ribosomal Protein LP0 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Rplp0-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Ribosomal Protein LP0 HDR-Plasmid (m) und Ribosomal Protein LP0 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Rplp0-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Rplp0-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.