Ribosomal Protein L24 Double Nickase Plasmid (h): sc-417652-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Ribosomal Protein L24 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Ribosomal Protein L24 Double-Nickase-Plasmid (h) und Ribosomal Protein L24 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RPL24 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Ribosomal Protein L24: sc-518250
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Ribosomal Protein L24 Double Nickase Plasmid (h) | sc-417652-NIC | 20 µg | $410.00 |
RPL24 kodiert das ribosomale Protein L24, eine essenzielle Komponente der großen 60S-Ribosomenuntereinheit, die zur Ribosomenassemblierung und zur Kontrolle der Translation beiträgt. Durch die Unterstützung der mRNA-Decodierkapazität und der Synthese neu entstehender Polypeptide beeinflusst RPL24 grundlegende Prozesse wie Zellwachstum, Proteostase und stressadaptive Translationsprogramme. Störungen ribosomaler Proteine können nukleolären Stress auslösen und Überwachungswege einschließlich der p53-Signalisierung aktivieren, wodurch Defekte der Ribosomenbiogenese mit veränderter Zellzyklusregulation verknüpft werden. Eine dysregulierte Ribosomenproduktion und Translation sind breit an onkogener Transformation und ribosomopathieähnlichen Phänotypen beteiligt, was RPL24 zu einem relevanten Knotenpunkt für mechanistische Studien der Translationskontrolle in menschlichen Zellen macht.
Ribosomal Protein L24 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RPL24-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RPL24 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RPL24-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RPL24-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.