Plasmide CRISPR d'Activation (h) Ribosomal Protein L18: sc-404259-ACT

RPL18 code la protéine ribosomique L18, un composant central de la grande sous-unité ribosomique 60S, qui participe à la liaison à l’ARNr et à l’assemblage de ribosomes compétents pour la traduction. En contribuant à la biogenèse des ribosomes et à la traduction de l’ARNm, RPL18 influence les programmes de protéostasie qui s’articulent avec le contrôle de la croissance cellulaire, l’adaptation au stress et la signalisation des points de contrôle. Une expression altérée des protéines ribosomiques et les réponses de stress nucléolaire sont fréquemment associées à une prolifération aberrante et à des phénotypes de dysrégulation du métabolisme de l’ARN, faisant de RPL18 un nœud pertinent pour étudier la régulation traductionnelle dans des contextes liés aux maladies. La perturbation des facteurs d’assemblage des ribosomes peut également affecter les voies de surveillance associées à p53 via une homéostasie ribosomique perturbée.

Ribosomal Protein L18 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RPL18 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ribosomal Protein L18 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RPL18 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RPL18, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ribosomal Protein L18. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RPL18 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ribosomal Protein L18 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ribosomal Protein L18 dans les cellules tumorales présentant une expression de RPL18 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.