RHBDL6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404212

Übersicht

RHBDF2 kodiert RHBDL6, eine intramembranäre Serinprotease der Rhomboid-Familie, die an Endomembranen lokalisiert ist und zur regulierten Proteolyse membranassoziierter Substrate beiträgt. Die Aktivität von RHBDL6 wurde mit Proteinkontrolle (Quality Control), intrazellulärem Transport (Trafficking) und dem Umsatz von Signalproteinen in Verbindung gebracht und ist in ER-assoziierten Abbau (ERAD) sowie stressadaptive Programme eingebunden, die die zelluläre Proteostase prägen. Über diese Mechanismen kann RHBDL6 die Signalweitergabe von Wachstumsfaktoren und Entzündungsprozessen beeinflussen, einschließlich Signalwegen, die mit der Verfügbarkeit von EGFR-Liganden und der Modulation der angeborenen Immunantwort verknüpft sind. Eine Fehlregulation der durch Rhomboid-Proteasen vermittelten Prozessierung wurde mit einer pathologischen Umgestaltung von Signalnetzwerken in der Krebsbiologie und in Modellen entzündlicher Erkrankungen assoziiert, was die Untersuchung der RHBDL6-abhängigen Proteolyse in krankheitsrelevanten Kontexten unterstützt.

Das RHBDL6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RHBDF2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RHBDF2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RHBDF2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RHBDL6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RHBDF2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RHBDL6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RHBDF2-Exone abzielen, die für die RHBDL6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RHBDF2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RHBDL6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RHBDL6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RHBDF2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RHBDL6 HDR-Plasmid (h) und RHBDL6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RHBDF2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RHBDF2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.