Ret Plasmide Double Nickase (m): sc-422654-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Ret Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Ret Double Nickase Plasmid (m) e il Ret Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ret. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Ret Antibody (6E4C4): sc-101423
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Ret Plasmide Double Nickase (m) | sc-422654-NIC | 20 µg | $410.00 |
Ret codifica una tirosin-chinasi recettoriale che funge da hub di segnalazione per i ligandi della famiglia GDNF tramite i co-recettori GFRα, coordinando nei topi programmi di sviluppo neuronale e renale. Una volta attivato, RET ingaggia le vie canoniche MAPK/ERK, PI3K–AKT e PLCγ per regolare sopravvivenza cellulare, differenziamento, migrazione e guida assonale. L’attività di Ret è cruciale per le linee cellulari derivate dalla cresta neurale e per la formazione del sistema nervoso enterico, e la sua disregolazione è associata a difetti del neurosviluppo e a contesti di segnalazione oncogenica. In quanto nodo di via, Ret è ampiamente studiato per analizzare la segnalazione dei fattori di crescita, la specificazione di linea e le risposte trascrizionali guidate dai recettori.
Ret Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ret nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ret. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ret. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ret interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.