Plasmide CRISPR/Cas9 KO RelB (m): sc-422643

Présentation

Relb code RelB, un membre de la famille NF-κB/Rel qui fonctionne principalement dans la voie non canonique de NF-κB. RelB forme couramment un hétérodimère avec p52 (NFKB2) afin de réguler des programmes transcriptionnels contrôlant la maturation des cellules dendritiques, l’organogenèse des organes lymphoïdes, la survie des lymphocytes B et la signalisation inflammatoire en aval de récepteurs tels que BAFFR, CD40 et LTβR. Dans les systèmes murins, l’activité de RelB relie les interactions entre immunité innée et adaptative en modulant l’expression de cytokines et de chimiokines et en influençant la présentation de l’antigène. La dérégulation de la signalisation dépendante de RelB est associée à une activation immunitaire aberrante et à un développement immunitaire altéré, ce qui fait de Relb une cible utile pour des études mécanistiques des réseaux inflammatoires et de la différenciation des cellules immunitaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RelB (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Relb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Relb, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Relb à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RelB.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Relb pour l'étude de la signalisation de RelB, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Relb essentiels à la fonction de RelB
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Relb pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RelB plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le RelB plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Relb. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RelB plasmide HDR (m) et le RelB (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Relb pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Relb définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.