Plasmide CRISPR/Cas9 KO Relaxin Receptor 1 (h): sc-417299

Présentation

RXFP1 code le récepteur 1 de la relaxine, un GPCR qui se lie à des peptides de la famille de la relaxine pour réguler la signalisation cAMP/PKA et MAPK, la production d’oxyde nitrique et des programmes transcriptionnels influençant le remodelage de la matrice extracellulaire. Dans les fibroblastes, les cellules musculaires lisses et les cellules vasculaires, l’activité de RXFP1 module la migration et l’adhérence cellulaires ainsi que le renouvellement de la matrice via un dialogue avec les voies TGF-β/SMAD et celles liées aux intégrines. Des altérations de la signalisation de RXFP1 ont été associées à une dérégulation des réponses fibrotiques et de l’homéostasie du tissu conjonctif, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la fibrose d’organes, de la biologie vasculaire et de la physiologie de l’appareil reproducteur. En tant que récepteur de surface présentant un biais de signalisation dépendant du contexte, RXFP1 est également utilisé pour étudier la désensibilisation des GPCR, leur internalisation et le couplage aux effecteurs en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Relaxin Receptor 1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RXFP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RXFP1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RXFP1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Relaxin Receptor 1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RXFP1 pour l'étude de la signalisation de Relaxin Receptor 1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RXFP1 essentiels à la fonction de Relaxin Receptor 1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RXFP1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Relaxin Receptor 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Relaxin Receptor 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RXFP1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Relaxin Receptor 1 plasmide HDR (h) et le Relaxin Receptor 1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RXFP1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RXFP1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.