Reg IIIα CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404278-ACT

REG3A kodiert das sekretierte C‑Typ‑Lektin Reg IIIα, ein antimikrobielles Protein, das besonders stark von intestinalen und pankreatischen Epithelzellen exprimiert wird und dort zur Integrität der mukosalen Barriere sowie zur angeborenen Immunabwehr beiträgt. Reg IIIα bindet bakterielles Peptidoglykan und hilft, die Interaktionen zwischen Wirt und Mikrobiom zu formen, indem es epitheliale Stressantworten mit der mikrobiellen Eliminierung verknüpft. Seine Expression wird durch zytokingesteuerte Signalwege wie IL‑22/STAT3 reguliert und während Entzündung und Gewebeschädigung häufig induziert, wodurch Programme der epithelialen Restitution und des Remodellings unterstützt werden. Eine fehlregulierte REG3A/Reg IIIα‑Aktivität wurde mit chronisch‑entzündlichen Darmerkrankungen, Pankreatitis und entzündungsassoziierten Prozessen beim kolorektalen Karzinom in Verbindung gebracht, was REG3A zu einem nützlichen Marker und funktionellen Knotenpunkt in Studien zur epithelialen Immunität macht.

Reg IIIα Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen REG3A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Reg IIIα Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des REG3A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der REG3A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Reg IIIα-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native REG3A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Reg IIIα-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Reg IIIα-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem REG3A-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.