Plásmido CRISPR de Activación (h) RecQL5: sc-406407-ACT

El gen humano **RECQL5** codifica la helicasa RecQ **RecQL5**, un factor de mantenimiento del genoma que regula la replicación y la transcripción del ADN para limitar la recombinación aberrante. RecQL5 interactúa con la ARN polimerasa II y participa en vías de respuesta al daño del ADN que favorecen la estabilidad de la horquilla de replicación, la resolución de estructuras secundarias del ADN y la supresión de reordenamientos genómicos asociados a la recombinación homóloga. Al preservar la integridad cromosómica, RECQL5 contribuye a una progresión precisa del ciclo celular y contrarresta la acumulación de mutaciones vinculadas a fenotipos de inestabilidad genómica. La desregulación de la actividad de RECQL5 se ha relacionado con un aumento de la señalización por daño del ADN y un control alterado de la recombinación, lo que la hace relevante para estudios de los mecanismos de inestabilidad genómica en modelos de enfermedad.

RecQL5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RECQL5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RecQL5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RECQL5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RECQL5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RecQL5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RECQL5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RecQL5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RecQL5 en células tumorales con expresión de RECQL5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.