Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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RD3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405841
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- RD3 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico RD3, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: RD3 Anticuerpo (A-9): sc-390653
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
RD3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-405841 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
RD3 (degeneración retiniana 3) codifica una pequeña proteína citosólica altamente enriquecida en los fotorreceptores y que contribuye al mantenimiento normal de la homeostasis de la fototransducción. RD3 regula el tráfico y la estabilidad de las guanilato ciclasa retinianas (p. ej., GUCY2D/GC-E), influyendo en la síntesis de cGMP y en la señalización downstream que controla la actividad de los canales iónicos en los segmentos externos. A través de estas interacciones, RD3 contribuye al direccionamiento de proteínas hacia el cilio/segmento externo y a la protección de las guanilato ciclasas frente a una activación inapropiada. La alteración de la función de RD3 se asocia con degeneraciones retinianas hereditarias, lo que la convierte en una diana útil para desentrañar los mecanismos de mantenimiento de los fotorreceptores y la señalización dependiente de cGMP.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO RD3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RD3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RD3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RD3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RD3.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RD3 para la investigación de la señalización de RD3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de RD3 críticos para la función de RD3
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RD3 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido RD3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido RD3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RD3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RD3 (h) y el plásmido HDR RD3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RD3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RD3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.