RCC1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402078-ACT

RCC1（regulator of chromosome condensation 1）は、クロマチン結合性のグアニンヌクレオチド交換因子をコードしており、染色体上でRan-GTPを産生することで、有糸分裂紡錘体の組み立ておよび核膜の再形成に必要なRan勾配を確立します。Ran依存的な核-細胞質間輸送を制御することにより、RCC1は細胞周期の進行、染色体凝縮、ならびに分裂後の核の構築を協調的に調節します。RCC1の機能は、クロマチン動態および有糸分裂制御との連動を介して、DNA複製やゲノム安定性維持のプログラムとも交差します。RCC1活性や発現の異常は、増殖性の表現型やチェックポイント応答の変化と関連づけられており、がん遺伝子性の増殖や異数性を支える機構の研究において重要です。

RCC1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RCC1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RCC1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RCC1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRCC1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RCC1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRCC1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRCC1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRCC1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRCC1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。