Plasmide CRISPR d'Activation (h) RBMXL2: sc-409899-ACT

RBMXL2 code une protéine se liant à l’ARN, dotée d’un motif de reconnaissance de l’ARN, impliquée dans la maturation des pré‑ARNm et la régulation des programmes d’épissage alternatif. En tant que membre de la famille RBMX/RBMXL, RBMXL2 est associée au contrôle post‑transcriptionnel de l’expression génique, reliant les choix d’épissage aux transitions d’état cellulaire et à l’organisation du transcriptome spécifique des tissus. La perturbation ou la dérégulation des protéines liant l’ARN et des voies du spliceosome peut modifier l’équilibre des isoformes et la stabilité des ARN, des processus fréquemment associés à une prolifération aberrante, à des défauts de différenciation et à des réponses au stress génomique. RBMXL2 est donc pertinente pour des études visant à comprendre comment les réseaux de facteurs d’épissage façonnent le métabolisme des ARN et influencent des phénotypes transcriptionnels associés aux maladies.

RBMXL2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RBMXL2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RBMXL2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RBMXL2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RBMXL2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RBMXL2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RBMXL2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RBMXL2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RBMXL2 dans les cellules tumorales présentant une expression de RBMXL2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.