RBM15 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-432890

Übersicht

Rbm15 kodiert RBM15, ein RNA-bindendes Protein, das an der posttranskriptionellen Genregulation beteiligt ist, einschließlich alternativem Spleißen, mRNA-Export und der Kontrolle der mRNA-Stabilität. RBM15 wird mit epitranskriptomischer Regulation in Verbindung gebracht, unter anderem durch Interaktionen mit m6A-Writer-assoziierten Komplexen, wodurch Zellzustandsübergänge und linienspezifische Genexpressionsprogramme mitgestaltet werden. In Mauszellen wurde RBM15 an hämatopoetischen und entwicklungsbiologischen Prozessen beteiligt gezeigt, bei denen eine koordinierte RNA-Prozessierung für Differenzierung und Proliferation erforderlich ist. Eine Fehlregulation RBM15-assoziierter RNA-Regulationsnetzwerke wird im Kontext onkogener Transformation und aberranter Differenzierungsphänotypen untersucht und unterstützt mechanistische Arbeiten zur RNA-Biologie und zu Krankheitsmodellen.

Das RBM15 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Rbm15-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Rbm15-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Rbm15 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RBM15-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Rbm15-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RBM15-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Rbm15-Exone abzielen, die für die RBM15-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Rbm15-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RBM15 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom RBM15 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Rbm15-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RBM15 HDR-Plasmid (m) und RBM15 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Rbm15-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Rbm15-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.