Plasmide CRISPR/Cas9 KO RASSF1 (h): sc-401931

Présentation

RASSF1 (Ras association domain family member 1) est une protéine d’échafaudage qui intègre des signaux liés à Ras avec la signalisation Hippo et la dynamique du cytosquelette afin de réguler la progression du cycle cellulaire, l’apoptose et la stabilité des microtubules. Grâce à ses interactions avec MST1/2 et d’autres composants de la voie, RASSF1 soutient des programmes pro-apoptotiques et de restriction de la croissance qui influencent l’inhibition de contact et l’intégrité génomique. Le gène est fréquemment réduit au silence par des mécanismes épigénétiques via l’hyperméthylation du promoteur dans un large éventail de tumeurs, ce qui en fait un locus suppresseur de tumeur couramment étudié en biologie du cancer. Une activité altérée de RASSF1 a également été associée à une dérégulation du contrôle mitotique et de la signalisation de réponse au stress, avec des effets en aval sur la prolifération et les phénotypes de survie cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RASSF1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RASSF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RASSF1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RASSF1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RASSF1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RASSF1 pour l'étude de la signalisation de RASSF1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RASSF1 essentiels à la fonction de RASSF1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RASSF1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RASSF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RASSF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RASSF1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RASSF1 plasmide HDR (h) et le RASSF1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RASSF1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RASSF1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.