Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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RANKL Double Nickase Plasmid (h): sc-400304-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das RANKL Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- RANKL Double-Nickase-Plasmid (h) und RANKL Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TNFSF11 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: RANKL: sc-377079
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
RANKL Double Nickase Plasmid (h) | sc-400304-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RANKL Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400304-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TNFSF11 kodiert den Rezeptoraktivator des NF-κB-Liganden (RANKL), ein Typ-II-transmembranäres und lösliches Zytokin der TNF-Superfamilie, das über TNFRSF11A/RANK signalisiert und so die Differenzierung, Aktivierung und das Überleben von Osteoklasten reguliert. Die Bindung von RANKL an RANK aktiviert sowohl die kanonische als auch die nichtkanonische NF-κB-Signalkaskade sowie MAPK- und NFATc1-gesteuerte Transkriptionsprogramme und koordiniert damit den Knochenumbau und dessen Kopplung an Immunzellfunktionen. Eine fehlregulierte RANKL-Signalgebung ist eng mit entzündlicher Osteolyse und Prozessen des Knochenverlusts assoziiert, darunter Osteoporose und die bei rheumatoider Arthritis auftretende Gelenkerosion, und trägt zu tumorassoziierten osteolytischen Mikroumgebungen bei. Da RANKL zudem Interaktionen zwischen dendritischen Zellen und T-Zellen sowie gewebespezifische Remodelling-Prozesse beeinflusst, wird TNFSF11 in Modellen der Osteoimmunologie und Skelettbiologie umfassend untersucht.
RANKL Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TNFSF11-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TNFSF11 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TNFSF11-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TNFSF11-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.