RANKL Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423448

Descripción general

El gen murino **Tnfsf11** codifica **RANKL**, un ligando de la superfamilia del TNF expresado por células estromales de la línea osteoblástica y por células inmunitarias activadas, que transmite señales a través de su receptor **RANK (TNFRSF11A)** para controlar la diferenciación, activación y supervivencia de los osteoclastos. La interacción **RANKL–RANK** activa programas transcripcionales dependientes de **NF-κB**, **MAPK** y **NFATc1**, fundamentales para el remodelado óseo, la organogénesis de los ganglios linfáticos y la comunicación cruzada entre células dendríticas y linfocitos T. En condiciones fisiológicas, la actividad de RANKL se contrarresta por la **osteoprotegerina (OPG/TNFRSF11B)** y contribuye al acoplamiento de la activación inmunitaria con el recambio esquelético. La desregulación de la señalización de RANKL se ha implicado en la erosión ósea inflamatoria, la pérdida ósea asociada a osteoporosis y las interacciones osteolíticas entre tumores y hueso, lo que la convierte en una diana clave para estudios mecanísticos de osteoinmunología.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RANKL (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tnfsf11 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tnfsf11 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tnfsf11 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RANKL.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tnfsf11 para la investigación de la señalización de RANKL, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tnfsf11 críticos para la función de RANKL
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tnfsf11 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RANKL CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido RANKL CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tnfsf11. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RANKL (m) y el plásmido HDR RANKL (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tnfsf11 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tnfsf11 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.