RANKL Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400304-ACT

TNFSF11 codifica o RANKL, uma citocina da superfamília TNF que atua como ligante-chave do receptor RANK (TNFRSF11A) para regular a diferenciação, a ativação e a sobrevivência de osteoclastos. A sinalização induzida por RANKL recruta adaptadores TRAF para ativar as cascatas de NF-κB e MAPK, conectando sinais imunes à remodelação óssea e às respostas inflamatórias. Além de suas funções na osteoimunologia, o RANKL contribui para a organogênese dos linfonodos e influencia a comunicação entre células dendríticas e células T. A atividade desregulada do eixo RANKL/RANK/OPG está associada à perda óssea patológica e a fenótipos de remodelação, sendo frequentemente investigada em contextos de alterações esqueléticas associadas à inflamação e de interações entre tumores e o microambiente ósseo.

RANKL O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TNFSF11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RANKL O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TNFSF11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TNFSF11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RANKL. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TNFSF11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RANKL no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RANKL em células tumorais com expressão de TNFSF11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.