Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Ral A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403983
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Ral A El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Ral A, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Ral A Anticuerpo (F-5): sc-374462
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Ral A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-403983 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
RALA codifica RalA, una pequeña GTPasa relacionada con Ras que alterna entre estados unidos a GDP y a GTP para coordinar la transducción de señales aguas abajo de las entradas de la familia Ras. La RalA activa regula el tráfico vesicular, la exocitosis polarizada, la endocitosis y la remodelación del citoesqueleto de actina mediante efectores como el complejo exocisto y RalBP1, vinculando la dinámica de membrana con la migración y la proliferación celulares. La señalización de RalA se integra con redes asociadas a MAPK y PI3K y contribuye al control de la citocinesis y la homeostasis mitocondrial. La actividad desregulada de RALA se ha implicado en contextos de señalización oncogénica y en programas alterados de motilidad celular, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de biología tumoral y de vías asociadas a la metástasis.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Ral A (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RALA en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RALA junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RALA tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Ral A.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RALA para la investigación de la señalización de Ral A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de RALA críticos para la función de Ral A
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RALA para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Ral A CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Ral A CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RALA. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Ral A (h) y el plásmido HDR Ral A (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RALA para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RALA definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.