Ral A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403983

Panoramica

RALA codifica RalA, una piccola GTPasi correlata a Ras che alterna ciclicamente gli stati legati a GDP e a GTP per coordinare la trasduzione del segnale a valle degli input della famiglia Ras. RalA attiva regola il traffico vescicolare, l’esocitosi polarizzata, l’endocitosi e il rimodellamento del citoscheletro di actina attraverso effettori quali il complesso dell’esocisto e RalBP1, collegando la dinamica di membrana alla migrazione e alla proliferazione cellulare. La segnalazione di RalA interagisce con reti associate a MAPK e PI3K e contribuisce al controllo della citochinesi e dell’omeostasi mitocondriale. Un’attività deregolata di RALA è stata implicata in contesti di segnalazione oncogenica e in programmi alterati di motilità cellulare, rendendolo rilevante per studi meccanicistici della biologia tumorale e delle vie associate alla metastasi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Ral A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RALA in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RALA insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RALA a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Ral A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RALA per lo studio della segnalazione di Ral A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RALA critici per la funzione di Ral A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RALA per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Ral A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Ral A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RALA. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Ral A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Ral A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RALA per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RALA definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.