Rad54B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403794-ACT

RAD54B codifica uma ATPase humana dependente de DNA da família SWI2/SNF2 que atua na recombinação homóloga e na manutenção do genoma. A Rad54B participa do reparo de quebras de dupla fita do DNA ao facilitar a invasão de fita mediada por RAD51, a remodelação da cromatina e o processamento de intermediários de recombinação durante o estresse replicativo. Por meio de seu papel na resposta a danos no DNA, RAD54B contribui para a segregação fiel dos cromossomos e ajuda a limitar a carga mutacional. A desregulação ou atividade alterada de RAD54B tem sido associada a fenótipos de instabilidade genômica relevantes para a biologia do câncer e à sensibilidade a agentes que danificam o DNA em sistemas experimentais.

Rad54B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RAD54B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Rad54B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RAD54B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RAD54B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Rad54B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RAD54B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Rad54B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Rad54B em células tumorais com expressão de RAD54B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.